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酶底物知多少?

酶反應常用的底物 ,快來跟著匯百試劑了解一下吧!
1.HRP的底物
(1)鄰苯二胺(OPD):是HRP最為敏感的色原底物之一。OPD在HRP的作用下顯橙黃色,加強酸如硫酸或鹽酸終止反應后呈棕黃色,最大吸收峰在492nm波長。OPD應用液穩定性差,易變色,需新配制后在1小時內使用,顯色反應過程需避光,而且具有致癌性。
(2)四甲基聯苯胺(TMB):TMB經HRP作用后變為藍色,加入硫酸終止反應后變為黃色,最大吸收峰波長450nm。TMB穩定性好,成色無需避光,無致突變作用,是目前ELISA中應用最廣泛的底物。缺點是水溶性差。
(3)其他:5-氨基水楊酸(5-ASA)和2,2-聯氮-二(3-乙基-苯并噻唑-6-磺酸)二銨鹽(ABTS)。
2.AP的底物
常用對-硝基苯磷酸酯(p-NPP),p-NPP經AP作用后的產物為黃色對硝基酚,最大吸收峰波長為405nm。
3.β-半乳糖苷酶(β-Gal)的底物
常用4-甲基傘酮基-R-D半乳糖苷(4-MUU),酶作用后,生成高強度熒光物4-甲基傘形酮(4-MU),其敏度性較HRP高30~50倍,但測量時需用熒光計。 

如何選擇酶底物?
多顏色的酶底物選擇與檢測系統和應用中的酶相匹配的底物時,需考慮以下幾個因素:
● 靈敏度:不同底物靈敏度也不同,有些酶底物隨著孵育時間延長,其靈敏度也會增加。
● 顏 色:在多種抗原標記實驗應用中,如色素沉著組織(黑色素瘤)和復染組織,顏色對比至關重要。在底物效果相同時,可根據個人喜好選擇顏色。
● 觀察效果:包括明場、熒光、暗場、電子顯微鏡和光譜成像等。
● 耐熱性:對于IHC/ISH雙標實驗,首先根據IHC實驗檢測步驟,選擇耐熱底物,然后進行熱變性以及ISH檢測。在需要進行熱誘導表位修復(HIER)的多重抗原標記試驗中,應首選耐熱性底物。

酶底物試劑原料:

 
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