?多聚-L-賴氨酸 (Poly-L-Lysine) 的原理及注意事項
多聚賴氨酸溶液是廣泛應(yīng)用的組織切片與玻片黏合劑,該多聚陽離子分子與組織切片上的陰離子相互作用會產(chǎn)生較強的黏合力。培養(yǎng)瓶表面的性質(zhì)對于細(xì)胞培養(yǎng)至關(guān)重要,細(xì)胞表面的糖蛋白(陰性)易于吸附在親水性的表面上,因而細(xì)胞培養(yǎng)表面如果有相當(dāng)含量的陽性電荷更能促進(jìn)細(xì)胞吸附,這正是運用多聚賴氨酸優(yōu)化細(xì)胞培養(yǎng)表面的重要所在。
應(yīng)用:
適用組織學(xué),免疫組織化學(xué),冰凍切片,細(xì)胞涂片,原位雜交等使用的玻片的防脫片處理,以防實驗操作過程中組織掉片。也可用于細(xì)胞培養(yǎng),增加細(xì)胞貼壁能力。
溶液配制:
用去離子水溶解,配制成母液備用。保存于-20℃。
玻片處理(匯百試劑:http://www.kkpkp.cn):
1.滅菌水稀釋聚賴氨酸溶液,一般的使用濃度為0.01%。
2.將玻片浸在稀釋的多聚賴氨酸溶液5分鐘。注意增加時間不會提高包被效果。
3.在60℃烘箱1小時干燥,或室溫18-26℃過夜干燥待用。
注意:
1.每100mL已稀釋的多聚賴氨酸溶液要包被的玻片40-90張, 超過90張片子將影響其黏合力。
2.用之前的玻片必須保持清潔。必要時用含1% HCl的70%乙醇溶液來清洗。
3.釋過的多聚賴氨酸溶液要放在2-8℃,至少在3個月內(nèi)是穩(wěn)定的。
4.用過的稀釋液要過濾,若出現(xiàn)渾濁或長菌要丟棄
5.多聚賴氨酸濃度可以高一些,吸出來的可以重復(fù)利用至少20次。
培養(yǎng)瓶處理(匯百試劑:http://www.kkpkp.cn):
1.包被培養(yǎng)板或者是培養(yǎng)瓶,一般多聚賴氨酸濃度為0.01%,
2.準(zhǔn)備100ml三蒸水,經(jīng)高壓滅菌處理。
3.0.01%的多聚賴氨酸以50微升每平方厘米的量均勻涂于培養(yǎng)底物的表面,室溫下靜置5min,吸除多余液體。
4.加入滅菌水,反復(fù)沖洗三次,無菌操作。
5.處理后無菌晾干備用。
6.回收后保持無菌的多聚賴氨酸可反復(fù)利用。
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